斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在，斐林试剂可与还原性糖反应生成砖红色沉淀。双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。二者溶液浓度不同、使用原理不同、使用方法不同。
溶液浓度不同
CuSO4溶液称为斐林试剂乙，其浓度为0.05g/mL；
CuSO4溶液（双缩脲试剂B）的浓度为0.01g/mL。
使用原理不同
斐林试剂是新配制的溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
使用方法不同
斐林试剂使用时，先等体积混合甲、乙两液，而后立即使用，反应需要加热（有时不加热也反应）；双缩脲试剂使用时，先加入NaOH溶液（1mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，振荡摇匀后观察现象。